Introducción: Neisseria gonorrhoeae desarrolla mecanismos de resistencia y multirresistencia a diversos antimicrobianos, lo que constituye una amenaza para la humanidad. Objetivo: caracterizar el comportamiento de la susceptibilidad antimicrobiana de N. gonorrhoeae. Método: se realizó un estudio de corte transversal que incluyó 152 cepas pertenecientes a la colección de cultivos del Laboratorio Nacional de Referencia de Neisserias Patógenas del Instituto “Pedro Kourí”, recibidas durante el período 2009-2013. La caracterización de las cepas se hizo por métodos convencionales y la susceptibilidad antimicrobiana se determinó por el método de E-test, según las recomendaciones del Instituto para Normas de Laboratorio Clínico. La presencia de betalactamasa se identificó por el método de la cefalosporina cromógena. Resultados: Los porcentajes más altos de sensibilidad se observaron frente a la espectinomicina (99,3%) y ceftriaxona (98,7%); la sensibilidad para la penicilina (10,8%) y tetraciclina (16,5%) fue baja; mientras que, la ciprofloxacina mostró el valor más elevado de resistencia (69,7%). La cifra de aislamientos resistentes a la gentamicina fue baja (1,3%). Se constató multirresistencia en 52% de las cepas, con la identificación de seis patrones y el predominio de las cepas resistentes a ciprofloxacina-penicilina-tetraciclina y de los  fenotipos QRNG (30,9%) y PP/TRNG (16,4%). Conclusiones: El laboratorio de microbiología constituye un pilar fundamental en la vigilancia de las infecciones de transmisión sexual. Debido al incremento de la resistencia de N. gonorrhoeae en el tiempo, el monitoreo continuo de la susceptibilidad antimicrobiana podría anticipar cambios oportunos para los tratamientos recomendados en el ámbito local.